掃一掃  即時聯系
新聞詳情

多肽的保存

發表時間:2018-12-03 14:36

多肽在-20℃很穩定,特別是冷凍干燥并保存在干燥器中,在將它們暴露于空氣之前, 冷凍干燥多肽可以放于室溫。這將是濕度影響減少,當無法冷凍干燥時,最好的方法是以小的工作樣量存放。
  對于含Cys, Met orTrP的多肽,脫氧緩沖劑對其溶解必不可少,因為這種多肽可易空氣氧化, 在封瓶前,慢慢流過多肽的氮氣或氬氣也會降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解,所有這些肽與不含這些有問題解苷的那些肽相比,生命期有限。 多肽的溶解性
  大多數肽的首選溶劑是超純抽氣水。稀乙酸或氨水分別對于堿性或酸性多肽的溶解很重要。這些方法不溶的多肽, 需要DMF、脲、guanidiniam chloride或acetonitnle來溶解,這些溶劑可能某些實驗有副作用。所以我們建議設計多肽時要加注意。
  殘基Ala, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val將全增加多肽的溶解難度。
  您需要特殊的多肽或任何技術幫助,請隨時與我們聯系。 我們包你完全滿意,對于我們不能適當合成的順序,我們不收費。多肽的保存和操作
  包裝 1mg或更少的多肽按凈重包裝,聲明的小瓶重不含相關抗離子和水。 例如,氨基酸分析決定的肽含量是80%, 在1mg樣品中,那么瓶中毛重是1.25mg。
  大量的多肽以毛重算。標出的重量含相關抗離子和水, 例如,25mg樣品中肽百分比為90%,那么,實際肽量為25mg×90%=22.5mg
  不要把肽含量和純度搞混了。肽的純度可能是100%, 而肽含量相關帶電基團(如Arg, Lys )的抗離子量和肽親水性決定。這是合成肽的本身特性。凍干肽的保存
  所有產品應存于冰箱, 最好為-20℃。多數肽以此方法可以存放幾年不變。肽溶液的保存
  溶液肽遠比凍干形式不穩定,溶液應為中性pH(pH5-7), -20℃保存的,為避免樣品的反復凍融, 最好分成小樣存放。一份樣品融凍后未用完, 應扔掉,細菌降解有時會成為溶液肽的麻煩, 為克服此,肽應溶于無菌水, 或肽溶液用0.2μ M濾膜過濾。
多肽的重建和操作
  多數肽溶于無菌蒸溜水。初次溶解時,要注意使初始濃度比要求濃度大,如果多肽僅有限溶解性, 這便允許加入其它溶解劑或緩沖鹽。
  如果多肽在水中的溶解性有限,有幾種選擇可幫助溶解:
  對堿性肽用稀乙酸(含Arg , Lys , His)
  酸性肽用稀氨水(含Asp, Glu)
  對極疏水的肽用10%有機修飾物(Acetonitnile , Methanol)
  極不溶的肽用DM50或DMF
  guanicline hydrochloride或脲的濃溶液也很有用, 與上述方法合用, 聲處理也是溶解多肽的有效手段。
多肽應用和保存
  多肽具廣泛的溶解性。多肽不溶的主要問題是形成二級結構。除了最太肽外,這點都會發生, 在有多重疏水殘基的肽中更顯著。鹽會促進二級結構形成。我們建議先在無菌蒸餾水或去離子中溶解多肽。如需要增加溶解率, 可用聲處理。溶解仍有問題, 加少量稀乙酸(10%)或氨水,會便于溶解。
  要長期保存多肽, 最好冷凍干燥,冷干粉可在-20℃或更低存放幾年而很少或無降解。溶液中的多肽遠不穩定。 多肽易受細菌降解,應用無菌純化水溶解。
  含有Met, Cgs或Try殘基的多肽溶液由于氧化,壽命有限。應溶于無氧溶劑, 為防止重復凍融的破壞, 建議溶解過量的肽的便實驗,其余多肽以固體形成保存。
HPLC分析和純化
  分析HPLC使用柱子和泵系統,可以經受傳遞高壓,這樣可以用極細的微粒(3-10μ m)做填料。由此多肽要在幾分鐘內高度被分析。
  HPLC分兩類:離子交換和反相。 離子交換HPLC依靠多肽和固相間的直接電荷相互作用。柱子在一定PH范圍帶有特定電荷衍變成一種離子體,而多肽或多肽混合物,由其氨基酸組成表現出相反電荷。 分離是一種電荷相互作用,通過可變PH, 離子強度, 或兩者洗脫出多肽,通常, 先用低離子強度的溶液,以后逐漸加強或一步一步加強,直到多肽火柱中洗脫出。離子交換分離的一個例子使用強陽離子交換柱。如sulfoethylaspartimide通過酸性PH中帶正電來分離。
  反相HPLC條件與正常層析正相反。多肽通過疏水作用連到柱上,用降低離子強度洗脫, 如增加洗脫劑的疏水性。通常柱子由共價吸附到硅上的碳氫烷鏈構成,這種鏈長度為G4-G8碳原子。 由于洗脫是一種疏水作用。長鏈柱比短鏈對小的, 高帶電肽好。另一方面大的疏水肽用短鏈柱洗脫好。 然而,總體實踐中, 這兩類柱互變無多少顯著差別,別類載體由碳水化合物構成, 比如苯基。
  典型的操作常由兩綬沖劑組成,0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile 0.1%TFA--H2o稀acetonitrile。用線型梯變以每分鐘0.5%到1.0%改變的速度混合。常見分析和純化用柱為4.6×250mm(3-10μ m)和22×250mm(10μ m). 如果用徑向填柱,那么大小是8×100(3-10μ m)和25×250mm(10μ m)
  大量各種緩沖劑含許多不同試劑,比如heptafluorobutyric酸,0.1%磷酸, 稀He formic酸(5-6%, pH2-4), 10-100mM NH4HCO3, 醋酸鈉/氨,TFA/TEA,磷酸鈉或鉀,異戊酚。這樣許多不同組合可形成緩沖劑,但要注意一點:硅反相柱料不能長時間暴露于高pH,甚至微堿pH, 因為這樣會破壞柱子。

分享到:
在線客服
 
 
熱線電話
021-50673982
021-60871011
掃一掃  即時聯系
———————————————
快乐贵州麻将下载信任 东方6十1今晚开奖 七星彩下期开奖时间和日期 八闽福建麻将透视 欢乐湖北麻将包赢神器 股票理财 河北十一选五开彩结 99822皇冠比分手机 山西快乐十分 3d字谜藏机图正版 捷报比分网数据回查 7m体育即时比分.url 凡乐武汉麻将官方下载 基金配资合法性 昨天3d开奖结果 淘宝彩票比分直播